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ELISA實(shí)驗(yàn)保存標(biāo)本異常問題解析
點(diǎn)擊次數(shù):47 更新時(shí)間:2025-07-03

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理,對待測抗體或者抗原進(jìn)行分析測定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個(gè)部分組成:免疫識別,信號輸出和數(shù)據(jù)處理

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ELISA試劑盒標(biāo)本保存,在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中是非常重要的標(biāo)本保存不當(dāng)可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常,如顏色背景深、非特異性染色、標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳等問題。以下是一些解決這些問題的方法:

1. 顏色背景深/非特異性染色

1) 充分清洗酶標(biāo)板:確保每個(gè)微孔的洗滌液量一致,清洗后用力按壓在吸水紙上,重復(fù)2-3次。

2) 避免污染:檢查試劑,避免錯(cuò)加其他試劑;操作時(shí)更換吸頭,使用移液器減少污染。

3) 控制孵育和顯色時(shí)間:嚴(yán)格按照說明書控制時(shí)間,避免過長。

4) 稀釋抗體:如果抗體濃度過高,按要求稀釋后再使用。

5) 保存底物避光:底物應(yīng)避光保存,避免曝光。

6) 正確使用濾鏡片:校正相應(yīng)波長后再讀取吸光值。

2. 所有孔均無明顯顏色

1) 檢查試劑:確認(rèn)試劑盒內(nèi)各組分正確配制和使用。

2) 確認(rèn)酶標(biāo)物狀態(tài):確保容器不含酶抑制劑,洗液容器已清洗。

3) 檢查操作步驟:嚴(yán)格審閱操作步驟,確保無遺漏。

4) 保存條件:在有效期內(nèi)使用,按說明書保存條件。

5) 平衡溫度:所有試劑和樣品應(yīng)室溫平衡30分鐘。

6) 控制孵育時(shí)間:確保足夠反應(yīng)時(shí)間。

7) 控制洗板次數(shù)和濃度:按說明書操作,避免過度洗滌。

8) 檢查濾光片:確認(rèn)讀取吸光值時(shí)使用的濾光片正確。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳

1) 標(biāo)準(zhǔn)品配制:嚴(yán)格按照說明書配制標(biāo)準(zhǔn)品。

2) 儲存條件:按照說明書條件保存,避免重懸組分室溫放置過久。

3) 混勻樣品:加入多種樣品后充分混勻,防止不溶物。

4) 正確洗板:洗滌液注滿孔中,但不溢出,確保洗板機(jī)無遺漏,洗滌充分。

5) 避免殘留:加液時(shí)吸頭盡量沿孔壁加液,避免孔壁殘留液體過多。

6) 避免污染:吸取不同試劑更換吸頭,配置不同組分使用不同器皿。

4. 樣本保存異常

1) 避免反復(fù)凍融:樣本保存時(shí)避免反復(fù)凍融,影響蛋白等分子。

2) 分裝保存:標(biāo)本收集后及時(shí)分裝,-20℃或-70℃保存。

3) 避免細(xì)菌污染:采集及分離過程注意無菌操作,避免細(xì)菌分解蛋白。

4) 平衡溫度:冷凍樣本恢復(fù)室溫時(shí)輕柔混勻,避免劇烈振蕩。

通過上述方法,可以有效解決ELISA實(shí)驗(yàn)中由于標(biāo)本保存不當(dāng)引起的異常現(xiàn)象,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。


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